Фіалка триколірна – світлолюбива рослина відкритих місць поширення. Яка виносить лише слабку тінь. Проростає серед кущів, в світлих соснових дрібнолистяних, рідше широколистяних лісах. Надає перевагу помірно вологим ґрунтах, але зустрічається і на більш сухих і вологих місцях. Росте переважно на лугових, досить багатих, слабо кислих або навіть нейтральних ґрунтах (рН 6,0-7,5).